细菌总数--中文百科全书

简介

细菌总数检验程式

水质参数之一，单位体积水中的细菌总量。其检验方法是:在玻璃平皿内,接种一毫升水样或稀释水样于加热液化的营养琼脂培养基中，冷却凝固后在37°C培养24小时，培养基上的菌落数或乘以水样的稀释倍数即为细菌总数。有的国家把培养温度定为35°C或其他温度，也有把培养时间定为48小时的。

分类

水中通常存在的细菌大致可分为三类

①天然水中存在的细菌。普通的是荧光假单孢桿菌、绿脓桿菌，一般认为这类细菌对健康人体是非致病的。

②土壤细菌。当洪水时期或大雨后地表水中较多。它们在水中生存的时间不长，在水处理过程中容易被去除。腐蚀水管的铁细菌和硫细菌也属此类。

③肠道细菌。它们生存在温血动物的肠道中，故粪便中大量存在。水体中发现这类细菌，可以认为已受到粪便的污染。致病性肠道细菌有沙门氏桿菌（伤寒和副伤寒菌）、志贺氏菌（痢疾菌）和霍乱弧菌等。

测定

一、测定方法平皿计数法

二、方法依据《生活饮用水卫生规範》

三、测定範围生活饮用水及其水源水中的细菌总数的测定

四、测定原理

细菌总数是指水样在一定条件下培养后（培养基成分，培养温度和时间、pH、需氧性质等）所得1mL水样所含菌落的总数。按本作业指导书所得结果只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数。

五、试剂

营养琼脂

报告

1、成分

A蛋白胨10g

B牛肉膏 3g

C氯化钠 5g

D琼脂 10～20g

E蒸馏水 1000mL

2、製法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，分装于玻璃容器中（如用国产含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经121℃灭菌20min，储存于冷暗处备用。

六、仪器设备

1、高压蒸汽灭菌器

2、干热灭菌箱

3、培养箱36±1℃

4、电炉

5、天平

6、冰柜

7、放大镜或菌落计数器

8、 pH计或精密pH试纸

9、灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、採样瓶等

七、分析步骤

1、生活饮用水

1.1以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。

1.2待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36±1℃培养箱内培养24h，进行菌落计数，即为水样1mL中的细菌总数。

2、水源水

2.1以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1:10稀释液。

2.2吸取1:10的稀释液1mL注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1:100稀释液。按同法依次稀释成

1:1000，1:10000稀释液等备用。如此递增稀释一次，必须更换一支1 mL灭菌吸管。

2.3用灭菌吸管取2~3个适宜稀释度的水样1mL，分别注入灭菌平皿内。以下操作同生活饮用水的检验步骤。

八、计算

1、菌落计数及报告方法

作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时套用。在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜採用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数。

2、不同稀释度的选择及报告方法

1）首先选择平均菌落数在30~300之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此範围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之（见实例1）

2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30~300之间，则视二者之比值来决定，若其比值小于2应报告两者的平均数（如实例2）若大于2则报告其中稀释度较小的（菌落总数如实3）。若等于2亦报告其中稀释度较小的菌落数（见实例4）。

3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见实例5）。

4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见实例6）。

5）若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，则应以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之，（见实例7）。

6）若所有稀释度的均无菌落生长，则以<1乘以稀释倍数报告之。

7）菌落计数的报告：菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，採用二位有效数位，在二位有效数位后面的数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数位后面的零数也可用10的指数来表示。